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Zoom sur zones de scellement
Vidéo en microscopie optique et à fluorescence montrant le détail d'une zone de scellement d'un ostéoclaste sur matrice d'apatite exprimant de l'actine GFP. Voir la vidéole (9s)
Formation de la ceinture de podosomes au cours de l’étalement
Vidéo en microscopie à contraste de phase et à fluorescence montrant l'évolution du cytosquelette d'actine-GFP dans un ostéoclaste fraîchement ensemencé sur une lamelle de verre. Les images ont été prises au cours de l’étalement. En tout début d'étalement, on observe la formation de lamellipodes permettant à l'osteoclaste d'adhérer à la lamelle qui précèdent l'apparition des podosomes. Ils présentent une structure de F-actine en "nuage". Les podosomes se formeront plus tard dans le nuage d'actine. (Délai entre 2 images: 46 secondes; Nombre d’images: 30; Temps d'enregistrement: 22 minutes.) Voir la vidéole (10s)
Groupement de podosomes dans des pré-ostéoclastes
Vidéo en microscopie à fluorescence d'un ostéoclaste exprimant de l'actine GFP, peu après la fusion des progéniteurs ostéoclastiques. Cette video en temps réel montre la dynamique des podosomes.Description: Ostéoclaste exprimant l'actine fusionnée à la protéine fluorescente GFP, filmé peu de temps après la fusion (temps d'enregistrement: 51 minutes). Les podosomes (points verts fluorescents) sont regroupés dans un "nuage" d'actine. Les podosomes existants, d'une durée de vie de 2 à 3 minutes disparaissent tandis que de nouveaux podosomes se forment dans le proche environnement donnant l’impression d’une migration de podosomes. Voir la vidéole (12s)
Dynamique des podosomes dans des pré-ostéoclastes par la technique du FRAP
Vidéo montrant la récupération de fluorescence après photoblanchiment (FRAP) d'actine GFP dans des podosomes d'ostéoclaste.Récupération de la fluorescence après photoblanchiment des podosomes : Une zone rectangulaire sélectionnée dans un groupe de podosomes est photoblanchie pendant 10 secondes. Le temps de récupération, d'environ 30 secondes, montre la dynamique des structures de F-actine des podosomes. Voir la vidéole (12s)
La zone de scellement est une structure dynamique d'actine révélée par FRAP
Vidéo montrant la récupération de fluorescence après photoblanchiment (FRAP) d'actine GFP dans des zone de scellement d'un ostéoclaste sur matrice d'apatite. Le temps de récupération, d'environ 30 secondes, met en évidence la dynamique des structures d'actine dans les zones de scellement.Description: Une zone rectangulaire sélectionnée dans la zone de scellement d’un ostéoclaste ensemencé sur apatite est photoblanchie ; elle récupère rapidement sa fluorescence, indiquant une forte dynamique avec un temps de retour estimé à environ 30 secondes.(Délai entre 2 images: 3 secondes; Nombre d’images: 46; Temps d'enregistrement: 139 secondes; Temps de blanchiment: 3-5 secondes). Voir la vidéole (14s)
Résorption de l'apatite et zones de scellement
Vidéo en microscopie optique et à fluorescence d'ostéoclastes exprimant de l'actine-GFP ensemencés sur des lamelles recouvertes d'un complexe d'Apatite et de Collagène (ACC). La video montre la dynamique des zones de scellement au sein d'ostéoclastes en train de fusionner (visualisation de l'actine GFP) et la résorption de la matrice d'apatite et collagène par les ostéoclastes.Description: Des ostéoclastes exprimant l'actine-GFP sont ensemencés sur lamelle d'Apatite Collagen Complex (ACC). Un gros ostéoclaste montrant deux zones de scellement qui se déforment, se divisent, fusionnent. La partie inférieure de l'ostéoclaste se rétracte, laissant apparaitre la zone d’apatite résorbée. A droite ... Voir la vidéole (17s)
Fusion de progéniteurs ostéoclastiques
Vidéo en microscopique optique montrant la fusion de progéniteurs ostéclastiques (des cellules murines de moelle osseuse ont été mis en culture en présence de MCSF+RANKL. séquence de 16 heures) Voir la vidéole (21s)
Anneaux de podosomes
Vidéo montrant l'évolution de groupes de podosomes au sein d'un ostéoclaste immature exprimant de l'actine fusionnée à la GFP : des regroupements de podosomes en anneaux évoluent par vagues vers la périphérie cellulaire puis se dissocient en groupes de podosomes.Description: Enregistrement d'un ostéoclaste immature (temps d'enregistrement: 60 minutes): Les groupes de podosomes forment des anneaux d’actine (ici fusionnée à la GFP) qui évoluent par vagues vers la périphérie puis se dissocient en groupes de podosomes. L'anneau d'actine a une durée de vie de 10-15 minutes. Voir la vidéole (35s)


